島津高效液相色譜儀的操作有什么要點和注意事項？

島津 HPLC操作要點，核心就是：穩開機、嚴過濾、慢平衡、規范進樣、沖干凈關機、勤維護。下面用大白話講全流程要點和禁忌，好記、好操作。

一、開機前：準備到位，少出問題

• 環境與電源

  室溫 15–30℃、濕度＜60%，遠離震動、陽光直射；電源接地要好，防止干擾與觸電。

• 流動相

• 必須用 色譜純 試劑 + 超純水

• 配好后 0.45μm 或 0.22μm 濾膜過濾，超聲脫氣 10–20 分鐘

• 緩沖鹽要現配現用，pH 要準；嚴禁未過濾直接上機

• 色譜柱

  確認型號、柱壓上限（一般 C18＜20 MPa）；新柱先看說明書活化

• 儀器檢查

  管路不漏液、溶劑瓶夠量、廢液桶清空、進樣針 / 閥干凈

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二、開機與排氣：關鍵是 “排干凈氣泡"

1. 開泵、檢測器、柱溫箱、工作站，等待自檢

2. 泵排氣（Purge）

• 打開泵排氣閥，按 Purge 鍵（默認約 3–5 min，大流速沖）

• 看到管路無氣泡再關閥；有氣泡必重排，否則壓力亂、基線跳

3. 設參數：流速（常用 1.0 mL/min）、柱溫（30–40℃）、波長、運行時間

4. 系統平衡

• 用流動相沖至 基線平穩、壓力穩定（通常 30–60 min）

• 含鹽流動相平衡更慢；沒平衡好別進樣

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三、進樣操作：準、穩、防污染

• 手動進樣（常用）

1. 樣品必須 0.22μm 過濾，無渾濁、無顆粒

2. 進樣針先用樣品潤洗 ≥5 次，排凈氣泡

3. 閥打到 Load 上樣 → 平穩切到 Inject 同時開始采集

4. 進樣量不超定量環的 50–70%（如 20μL 環≤10–15μL）

• 自動進樣器

• 樣品瓶液面夠、瓶蓋擰緊、無氣泡

• 設定進樣體積、洗針程序（每樣后洗針）

• 樣品盤輕推到位，聽到 “咔嗒" 再運行

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四、運行中：盯壓力、看基線、控溫度

• 壓力監控（最關鍵）

• 正常壓力波動＜±5%；突然升高 30%→立即停泵

  堵因：濾膜臟、柱頭堵、管路折扁、鹽結晶

• 壓力驟降：漏液、溶劑空、單向閥壞

• 基線與峰形

  漂移大：未平衡、溫度變、氘燈弱、流動相污染

  峰拖尾 / 前伸：柱臟、pH 不對、過載、進樣污染

• 嚴禁

• 流速猛升猛降（要逐步調）

• 柱溫忽高忽低

• 運行中拆柱、擰接頭（必須先停泵、泄壓）

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五、關機：重中之重 ——沖干凈，特別是含鹽

• 用純水 / 10% 甲醇沖鹽（最容易忘）

• 流動相含緩沖鹽：

  先用 10% 甲醇 / 水 0.5–1.0 mL/min 沖 45–60 min → 再純甲醇沖 30 min

• 只用有機溶劑：直接甲醇 / 乙腈沖 30 min

• 色譜柱保存

• 反相 C18：純甲醇或乙腈封存，兩頭堵頭

• 正相柱：正己烷封存

• 長期不用：定期拿出來沖一遍

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六、日常維護：延長壽命、數據穩

• 每周

• 更換 / 清洗流動相吸濾頭（堵了最易壓力高）

• 擦進樣閥、洗針、擦檢測器流通池窗口

• 每月

• 檢查泵密封墊（漏液就換）

• 檢查氘燈使用時間（壽命約 2000 小時，能量低就換）

• 每季度

• 測柱效（理論塔板數），判斷柱子要不要再生或更換

• 
  

七、最容易犯的 5 個錯（一定要避開）

1. 流動相不過濾、不脫氣 → 堵柱、基線亂、壓力不穩

2. 用含鹽后不沖鹽 → 鹽結晶毀泵、毀柱、毀閥（最傷儀器）

3. 進樣不過濾 / 樣品臟 → 柱頭污染、峰形差、柱壓飆升

4. 流速 / 溫度突變 → 保留時間飄、柱壽命短

5. 關機不沖柱直接關 → 下次開機必出問題

6. 
   

簡單記：過濾脫氣、充分平衡、緩慢升降、含鹽必沖、干凈關機。做到這幾點，島津 HPLC 基本穩定、少壞、數據準。

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